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检测芦花鸡苗病疫抗原操作

2019/5/20 15:02:36      点击:
  利用免疫酶技术测定抗原或抗体的方法很多,下面仅简要介绍3种适合猪场使用的免疫酶技术。斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA)材料  硝酸纤维滤膜(孔径0.45微米),0.01摩/升、pH值7.2的磷酸盐缓冲盐水,封闭液(磷酸盐缓冲盐水加人10%马血清或0.1%明胶),30%过氧化氢(H2O,),3,3'-二氨基联米胺(DAB)抗原液,阴性对照,待检液,待检血清,阳性血清及阴性血清,酶标兔抗猪免疫球蛋白G(IgG),0. 05摩/升三羟甲氨基甲烷盐酸缓冲液,洗涤液(磷酸盐缓冲盐水加人0. 05%吐温20)。芦花鸡苗的检查。

  检测抗原操作:

      第一,硝酸纤维滤膜(NCM)的处理:在滤膜上划6毫米X6毫米的方格,在方格中央用蘸水笔尖的圆尾末端压成圆形痕迹。置于蒸馏水中浸泡10分钟,取出后晾干备用。

      第二,点样:取1微升待检液在硝酸纤维滤膜圆圈内点样,同时设立阳性与阴性对照,自然干燥或置37°C温箱中干燥。
      第三,封闭:将硝酸纤维滤膜置于封闭液中,37°C 30分钟,用洗涤液洗涤1次,约3分钟。

      第四,加猪阳性血清,将硝酸纤维滤膜置于猪阳性血清中,37C作用1小时,取出用洗涤液洗涤3次,每次3分钟。

      第五,加酶标免抗猪免疫球蛋白 G,37C作用1小时,然后洗涤3~4次,每次3分钟。

      第六,加底物溶液(0.05摩/升三羟甲氨基甲烷盐酸级100毫升,加3,3'-=氨基联苯肢40毫克,30%过氧化氢冲液50微升),作用5~20分钟。
      第七 ,终止显色,将硝酸纤维滤膜置于蒸馏水中冲洗2~